在蛋白质组学研究中，蛋白质定量具有非常重要的意义。而不同的蛋白样品，由于其干扰组分不同，因此测定蛋白浓度的方法也不一样。
准确的蛋白质定量有利于对蛋白质表达谱的定量比较，以及对蛋白质理化性质的分析，目前常用的蛋白质快速定量方法主要有直接紫外吸收法、Bradford法、Lorry法，以及BCA法这四种。
下面主要说说紫外吸收法和BCA法。
一、紫外吸收法：最简单的定量方法
紫外吸收法的优势是：测定蛋白质含量简便、迅速，不消耗样品，而且低浓度盐类也比较不干扰测定。
由于蛋白质中存在酪氨酸和色氨酸，所有蛋白质都具有280nm附近的紫外吸收峰，同时蛋白质溶液的光密度OD280nm与其浓度呈正比关系，可以以此来对蛋白质定量。例如在柱层析分离纯化中，就常用到280nm进行紫外检测，判断蛋白质吸附或洗脱情况。
方法虽然简单，但也存在极大的缺陷。
一方面，由于每种蛋白质的氨基酸组成都不同，在测定时，会有一定的误差；另一方面，如果样品中有嘌呤、嘧啶等吸收紫外光的物质，则会造成干扰。
所以此种办法只适用于测定与标准蛋白质氨基酸组成相似的蛋白质，即适用于纯化的蛋白质定量。
二、BCA法：基于试剂的蛋白定量法
BCA蛋白定量试剂盒是一种基于二喹啉甲酸比色法的总蛋白检测和定量试剂盒。BCA蛋白定量法的优势是：快速灵敏、稳定可靠，且对不同种类蛋白质变异系数甚小，因此也深受专业人士青睐。
BCA法的原理：在碱性环境下，蛋白质与Cu2+结合，将Cu2+还原为Cu1+。喹啉甲酸（BCA）与Cu1+形成紫色的络合物，这种络合物在562 nm处产生光吸收峰值，光吸收强度在一定范围内与蛋白质含量呈近似线性关系。使用比色法可以对蛋白质进行检测和定量，可以对大量样品进行检测。
BCA法对去垢剂兼容性比Lowy法更强，且检测不同蛋白质分子的变异系数远小于考马斯亮蓝。
总的来说，紫外吸收法适用于纯化的蛋白质定量，而基于试剂的BCA蛋白定量法，则更适用于未完全纯化的蛋白、细胞裂解液的浓度测定等。
三、关于BCA蛋白定量法的一些小tips
1.干扰BCA定量分析的物质有哪些？
主要是海原型位置、螯合剂，以及强酸或强碱，即便在很低的浓度下也能产生影响。
2.如何选择BCA法和Bradford法？
由样品中的干扰物质决定。BCA法去垢剂兼容性强，如果蛋白抽提试剂中不含螯合剂、还原剂，但含有大量去垢剂，可以使用BCA法；反之使用Bradford法。
3.BCA法能否检测多肽浓度？
不能，多肽浓度要用专门的多肽浓度检测试剂盒检测。
文章来源：每日生物评论
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