一、蛋白质分离技术1.双向凝胶电泳 双向凝胶电泳是一种高分辨率的蛋白质分离技术。一般能分离到1000-3000个蛋白质点,最佳分离到11000个左右的蛋白质点。但是强酸、强酸、相对分子质量过大、过小的蛋白质难以分离,且实验的重复性差。
2 . 色谱 色谱技术是利用各种物质在固定相和流动相之间不同的分配系数,使其在相对运动的两相间经反复多次分配,以不同速度移动,从而获得分离的方法。毛细管电色谱和多维液相色谱由于分辨率高,所需样品量少,易于和电喷雾离子化质谱联用而成为蛋白质组分析的重要手段。
二、蛋白质鉴定技术1、质谱 质谱技术能鉴定蛋白质并准确测量肽段和蛋白质的相对分子质量、氨基酸序列及翻译后的修饰。其工作原理是通过离子化装置将分子转化为气态离子,根据不同离子间的质荷比(m/z)的差异来分离并确定相对分子质量。质谱技术能与多种蛋白分离技术联用,且准确度高。
2.蛋白质芯片 与基因芯片类似。蛋白质芯片将蛋白质结合到固相基质上,然后与要检测的细胞或组织“杂交”,从而对未知蛋白进行分离和鉴定。蛋白质芯片的基本原理是利用蛋白质间以及蛋白质与其它小分子间的相互作用。蛋白芯片具有其高通量、高特异性和高灵敏度的优点,适用于蛋白质表达谱分析。
三、生物信息学 生物信息学已广泛应用到现代生命科学的各个领域。目前,在蛋白质组学方面的应用主要有:构建与分析蛋白质双向凝胶电泳图谱数据库;蛋白质氨基酸序列、蛋白质结构域、蛋白质相互作用等数据库的建立和检索;蛋白质结构的预测等。
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